水稻种子无菌苗培养的条件筛选

 2024-02-06 10:02

论文总字数:11319字

摘 要

以水稻种子为材料,采取MS培养基,研究了乙醇处置水稻种子的时候对水稻种子抽芽的影响、次氯酸钠浓度对水稻种子萌生的影响和它们的灭菌结果,发明乙醇处置时候越长,出芽率越低,出芽时候越长且灭菌结果较次氯酸钠差;次氯酸钠浓的灭菌结果最佳且对种子的影响较小。还研究了多效唑浓度、蔗糖浓度、琼脂浓度、pH值对水稻苗的影响。结果表明:跟着多效唑浓度的增高,表现出显著的矮化结果;蔗糖浓度过高,会使水稻根系发生延缓;琼脂浓度过高影响水稻扎根,从而影响水稻的正常生长;当pH值低于5时会影响培养基凝固,还会影响水稻生根,当pH值为7时,更有利于水稻根的生长。因此,最适水稻种子生长的培养基为:基本培养基 5-15mg/L多效唑 30g/L蔗糖 7g/L琼脂,最适pH值为7左右。

关键词:水稻,MS培养基,乙醇,次氯酸钠,多效唑

Abstract:Rice seeds as materials, using MS medium were studied ethanol time rice seed on rice seed germination, sodium hypochlorite concentration on rice seed germination and their sterilizing effect, found that the longer the ethanol processing time, budding rate the lower the longer the budding time was better than sodium hypochlorite and poor sterilization; sterilization concentrated sodium hypochlorite best and less impact on the seeds. MET also studied concentration, concentration of sucrose, agar concentration, pH value of rice seedlings. The results showed that: with the increase of paclobutrazol concentration showed significant dwarfing effect; sucrose concentration is too high, the occurrence of rice root delay; agar excessive concentrations of rice roots, thus affecting the normal growth of rice; when the pH is below 5:00 will affect the medium solidified, will also affect rice root, when the pH value is 7:00, more conducive to the growth of rice roots. Therefore, the optimum medium for the growth of rice seed: basic medium 5-15mg / L MET 30g / L sucrose 7g / L agar, the optimum pH value of about 7.

Keywords:Rice, MS medium, ethanol, sodium hypochlorite, paclobutrazol

目 录

1 前言 4

2 材料与方法 6

2.1 试验材料 6

2.2 试验方法 7

2.2.1 水稻种子的灭菌处理 7

2.2.2 水稻种子培养的条件筛选 7

3 结果与分析 7

3.1 乙醇处理水稻种子的时间对水稻的影响以及灭菌效果 7

3.2 次氯酸钠浓度对水稻种子的影响以及灭菌效果 8

3.3 多效唑浓度对水稻苗生根的影响 9

3.4 蔗糖浓度对水稻苗生根的影响 10

3.5 琼脂浓度对水稻苗生根的影响 10

3.6 pH值对水稻苗生根的影响 11

结 论 12

参 考 文 献 13

致 谢 15

1 前言

水稻作为我国重要的的粮食作物,有着悠久的栽培历史。而且,水稻有着非常丰富和深入的基因组研究的基础,是一种模式作物[1],可以提供各种各样的研究。水稻作为粮食作物,除可用做食品,还可在工业和医学方面用到,可见水稻对我们生活有着重要影响[2]。因此为了方便进行对水稻的研究,培育水稻试管苗就显得很重要。为了使水稻得到更好的生长,种子的灭菌和培养基的配制就显得非常重要。本次实验采用的是MS培养基,通过改变培养基中的pH值、蔗糖和琼脂浓度以及多效唑的含量,观察并对比水稻种子在不同培养基中生长情况。

MS培养基作为植物培养中常用的培养基,无机盐浓度很高,这样能够保证植物组织生长所需的各种营养物质以及还能使愈伤组织更快地形成,因此可用于植物的一些部位的培养,液体介质可用于细胞悬浮培养,有研究表明[3]显然是成功的。因为配方中的离子浓度较高,因此有利于保存,在消毒的同时,也不会影响离子间的平衡,这样能让培养基在灭菌时,不会被破坏。在MS培养基中,它的无机成分所占的比例比较合适,能够满足植物在生长过程中的营养和生理上的需求,是很适合培养植物的培养基。其它培养基的基本成分和MS培养基相比,是培养基中的无机盐含量没有MS培养基高。

下面简单介绍下MS培养基所需的营养物质[4]:大量元素,微量元素,无机盐,有机活性物质,蔗糖,生长素。MS培养基的配制还有一定的特殊要求,勒飞将其总结为“五点注意”[5],总结如下:1 培养基母液不能放在阳光下照射,必须4℃避光保存,因为培养基的母液浓度很高,因此可以有效地抑制细菌的生长,从而增加了培养基的存放时间,这样可以保存很长时间,不用到用的时候再急急忙忙地配。在培养植物时,往往会在MS培养基中经常添加一些常用的激素,因为激素的用量极小,不方便称量,所以这些激素可经过稀释后再进行吸取。配置培养基中有些药品为易爆品或是具有致癌作用,需要注意。在调节培养基的pH时,因为培养基在灭菌后,pH 将变有所变化,所以可以将pH 进行适当的调整。

多效唑是一种化学物质,可以抑制幼苗的生长,促进侧芽的发生。所以经常会与水混合在苗期喷施,防止长陡苗。多效唑的作用机理是能抑制赤霉素的生物合成从而控制由赤霉素所引起的一系列反应,赤霉素能够促进节间的生长,而多效唑是一种赤霉素的拮抗物,因此,它能抑制内源GA的生成,从而抑制草本和木本植物的生长。多效唑还能减少IAA的合成或代谢。对于植物体内赤霉素的影响在于抑制赤霉素生物合成,由于多效唑的靶酶是贝壳杉稀氧化酶,是通过抑制贝壳杉烯氧化成贝壳杉烯酸,从而阻碍赤霉素的合成,因此使植物体内赤霉素的含量有所下降[6]

多效唑可以通过对植物体内的激素平衡的调节,使植物生长延缓,从而使植物可以存活更长时间,同时还能抑制茎、枝的生长,还能促进侧枝的发生,促进开花和结果,增强抗旱,抗寒性,提高耐盐和延缓植物衰老等一些抗逆性。与其他植物生长抑制剂相比,它具有一系列的优点,如低剂量,价格低廉,效果明显等,因而被广泛应用于工厂的生产。

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