浒苔糖聚物的分离纯化、结构鉴定及抗氧化活性研究

论文总字数：18253字

摘 要

作为一种自古以来被我国沿海居民食用，药用的水生植物，浒苔已经被报道出了多种生物活性。本文使用热水浸提法和碱抽提法两种方法对浒苔多糖进行提取，并通过DEAE纤维素层析柱和Sephadex凝胶层析柱对浒苔多糖进行分离纯化，共得到12个多糖组分。本文对其中含量最大的两个组分，进行了红外、紫外光谱测定，初步确定了它们的特征官能团以及多糖的纯度。使用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法测定PWEP-6的纯度和分子量，结果表明该组分为均一的单组分糖聚物，分子量为22905Da。对多糖PAEP-6进行了超氧自由基清除、DPPH自由基清除、羟基自由基清除和降低功效的测定，表明已得到浒苔多糖具有良好的抗氧化的活性，且在一定浓度内，清除活性的增强随着样品浓度的增强而增强。

关键词：浒苔多糖，分离纯化，抗氧化活性

Abstract

In this paper, the polysaccharides from Brassica oleracea L. were extracted by hot water extraction and alkali extraction, and separated and purified by DEAE cellulose chromatography column and Sephadex gel chromatography column. A total of 12 polysaccharide components were obtained. Taking the two components with the largest content as an example, infrared and ultraviolet spectrum scanning were carried out to preliminarily determine the characteristic functional groups of the polysaccharide and the purity of the polysaccharide. The purity and molecular weight results of PWEP-6 were determined by high performance gel permeation chromatography (HPGPC). The results showed that the component was a homogeneous one-component glycopolymer having a molecular weight of 22,905 Da. The analysis of the pharmacological activity of PAEP-6 showed that the polysaccharide polysaccharide had antioxidant activity by measuring the superoxide radical scavenging activity, DPPH radical scavenging activity, hydroxyl radical scavenging activity and reducing efficacy of the polysaccharide. Within a certain concentration, the enhancement of scavenging activity is enhanced as the concentration of the sample is increased.

KEY WORDS:Enteromorpha polysaccharide, separation and purification, pharmacological activity, antioxidant activity

目录

第一章 绪论 1

1.1. 浒苔介绍 1

1.2. 浒苔的研究进展 1

1.2.1. 浒苔多糖的提取方法 1

1.2.2. 浒苔多糖的分离纯化 2

1.3. 浒苔多糖的药理活性 3

1.3.1. 浒苔多糖的抗氧化性 3

1.3.2. 浒苔多糖的免疫调节 3

1.3.3. 浒苔多糖的降血脂活性 3

1.3.4. 浒苔多糖的抗肿瘤活性 4

1.4. 研究目的与意义 4

第二章 浒苔粗糖聚物的提取、分离和纯化 5

2.1. 实验仪器和实验材料 5

2.1.1. 实验仪器 5

2.1.2. 实验材料 5

2.2. 实验方法 5

2.2.1. 浒苔多糖的提取 5

2.2.2. 浒苔多糖脱蛋白、透析 5

2.2.3. 浒苔多糖的分离纯化——DEAE-52离子交换柱层析 6

2.2.4. 浒苔多糖的分离纯化——Sephadex G-100凝胶层析柱 6

2.2.5. 多糖、核酸和蛋白质的检测 6

2.3. 实验结果与讨论 7

2.3.1. 浒苔多糖的制备 7

2.3.2. 浒苔多糖 DEAE 纤维素分离结果 7

2.3.3. Sephadex－100 凝胶层析柱的纯化 8

2.3.4. 浒苔多糖蛋白质含量测定 9

第三章 浒苔糖聚物的结构鉴定 10

3.1. 浒苔多糖的红外线扫描 10

3.2. 浒苔多糖的紫外光谱扫描 10

3.3. 浒苔多糖的纯度与分子量测定 10

3.4. 实验结果与讨论 11

3.4.1. 浒苔糖聚物的红外光谱分析结果 11

3.4.2. 浒苔糖聚物的分子量与纯度分析结果 11

第四章 浒苔多糖的抗氧化性测定 12

4.1. 超氧自由基测定 12

4.2. 1,1-二苯基-2-苦基肼基（DPPH）自由基清除 13

4.3. 降低功效测定 13

4.4. 羟基自由基清除活性 13

4.5. 实验结果与讨论 13

第五章 结果与分析 15

参考文献 16

致谢 18

1. 绪论
   1. 浒苔介绍

浒苔（Enteromorpha），一种生长在中潮带石沼中的藻体，民间亦称作“苔条”。在中国沿海地区皆有分布^[1]。浒苔种类约40种，其中中国有11种，种类包括肠浒苔、扁浒苔、条浒苔等。

浒苔具有较高的营养价值，其中富含碳水化合物、蛋白质、粗纤维、氨基酸、维生素、脂肪酸及多种矿物质^[2]。浒苔可食用，过去，它被中国沿海地区的居民用作食用和医用藻类。其中，条浒苔是沿海人们经常采摘食用或用作饲料的藻类，肠浒苔肠浒苔具有清热解毒，消炎的功效。

2008年奥运会期间，黄海发生了大规模的绿潮，这种绿潮藻大部分为浒苔。由于海体的富营养化，海藻会以惊人的速度大量繁殖。大量繁殖的藻华生物会堵塞鱼类等生物的呼吸道，鱼类无法正常呼吸会导致死亡，还会遮挡阳光射入海体，使水底的其他生物因缺少阳光死去。藻华生物本身死亡后也会因为腐烂分解大量消耗氧气从而导致其爆发的水域最终成为死水。目前，国内外把浒苔一类的大型绿藻爆发称为“绿潮”。

2008年至今，我国东部沿海地区已经连续多年爆发“绿潮”，不仅影响了水体的生态平衡，也对沿海地区的旅游业等有极大影响。这种生物质除了部分被用作食品、饲料和肥料以外还有大部分作为废物被丢弃并掩埋，每年都需要投入大量人力物力进行打捞处理，因此，探寻浒苔资源利用的有效途径，对于系统解决绿潮带来的生态、环境及经济问题具有重要意义。

• 1. 浒苔的研究进展

1962年浒苔多糖首次被报道后，它的多种多糖和其生理活性逐渐被研究、报道出来，比如抗菌作用^[3]、免疫调节作用^[1]、降血脂作用^[2]和抗癌活性^[4,5]。同时，根据研究，浒苔多糖具有抗氧化性，可以作为新型的抗氧化剂和保湿剂^[6]。

• • 1. 浒苔多糖的提取方法

目前，浒苔粗多糖的提取方法主要有四种，一是利用浒苔多糖在热水中的溶解度使浒苔多糖溶出的热水浸提法。二是利用浒苔多糖的硫酸基团，使碱性溶液与浒苔酸性多糖结合从而溶出多糖的碱抽提法。三是使用复合酶制剂作用于浒苔细胞壁使其降解溶出多糖的酶提取法；四是通过微波、超声辅助提取，充分破碎细胞使多糖大量溶出，这种方法称为微波、超声辅助提取法。

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