论文总字数：17258字

摘 要

本课题主要目的是制订出精确且方便有效控制依达拉奉含量的方法，并对其进行方法学验证。通过对流动相组分的选择及分配比例的调节，以及比较不同供试品的浓度、流速及检测波长下的实验结果，来观察液相色谱图中所显示的分离情况和主峰面积，从而计算得出依达拉奉原料的含量。完成对依达拉奉含量测定方法进行方法学验证的实验，整理然后通过比较各种方法得出的实验结果确定最佳的测定条件证结果专属性实验，检验空白溶剂、辅料、强制降解等对含量测定的影响性，验证依达拉奉的线性和范围，定量限及回收率是否符合规定，完成精密度、溶液稳定性的验证通过各种可能对检测含量有影响的不同条件改变验证其耐用性。

关键词 依达拉奉，含量测定，方法学验证

Determination and verification of the content of Edaravone

Abstract  

The main purpose of this paper is to develop accurate and convenient and effective control method of the content of edaravone, and carries on the method validation. Through the flow phase group selection and allocation proportion of regulation, and comparison of different sample concentration, flow rate and the detection wavelength of experimental results to observe liquid phase chromatic shows the separation and peak area, can calculate the content of edaravone raw materials. Complete experimental methods to verify the methodology for the determination of the content of edaravone, finishing and then through the comparison of various methods that the experimental results to determine the optimal determination of permit conditions results specificity tests, inspection solvent blank, accessories, forced degradation on the determination of the effect of, verification of edaravone linearity and range, limit of quantification and recovery rate of compliance with the provisions of the, complete verification of precision solution stability and through various may affect the determination of different conditions change to verify its durability.

Keywords edaravone, determination, method validation

目 录

摘 要 I

Abstract   II

第一章 引言 1

1.1 依达拉奉的简介 1

1.2 依达拉奉国内外的发展状况及前景 1

1.3 在药物含量测定中HPLC的运用 2

第二章 依达拉奉含量测定方法的确定 3

2.1 检测波长的确定 3

2.2 流速的选择 3

2.3含量测定的条件 4

2.4含量测定实验方法 4

2.4.1 系统适用性实验 4

2.4.2 测定含量法 4

第三章 依达拉奉的方法学验证 6

3.1 专属性 6

3.1.1 空白溶剂影响实验 6

3.1.2强制降解实验 6

3.1.2.1 未破坏实验 6

3.2 定量限和检测限 8

3.3 线性和范围 9

3.4 回收率 10

3.5 精密度 11

3.5.1 重复性实验 11

3.5.2进样精密度试验 11

3.6 溶液稳定性 11

3.7 耐用性试验 12

3.7.1 不同的流动相pH值 12

3.7.2 不同的流动相盐浓度 13

3.7.3 不同的流动相比例（盐溶液：甲醇） 13

3.7.4 不同的流速 13

3.7.5 不同的柱温 14

3.7.6 不同的波长 14

3.7.7 不同的色谱柱 15

3.8 样品的测定 15

第四章 结论 16

致谢 17

参考文献 18

附录 19

第一章 引言

1.1 依达拉奉的简介

在众多的脑神经保护剂当中，依达拉奉药品是人类历史首先被公认的产品。3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮是依达拉奉产品中活性成分的化学名称，它的化学分子式为C₁₀H₁₀N₂O。其化学相对分子质量是174.20。结构式如下图1.1所示。

图1.1 依达拉奉主成分的结构式

依达拉奉是通过消除自由基和守卫内质网的功能等多种路径对组织缺血再灌注毁伤，神经性细胞凋亡、变性等神经系统疾病具有显著的治疗效果，如果和其他神经药物联合使用来治疗急性脑梗死，其疗效将会有成倍的趋势^【1】。

在临床应用方面，依达拉奉可用于脑梗死急性期，以此来改善神经系统的症状，增强日常生活的能力，减轻失去活动能力的状态。它被人们赋予能够帮助在脑梗死发生后，将副作用及护理降低到最小程度，彻底改变传统药物治疗概念的美好愿望。在此次对依达拉奉方法验证的研究当中，我们通过采用反相高效液相色谱法对依达拉奉原料进行分离分析检测，创立了本次依达拉奉含量测定的实验方法，而且良好的通过了药品质量标准分析方法即GMP的验证。

1.2 依达拉奉国内外的发展状况及前景

据相关统计数据显示，脑卒中（也称中风）现在是中老年人常见的多发病，位居当今人类死亡三大杀手中脑血管病、癌症、心脏病的榜首。更是三大疾病中增速最快、治愈最慢、去世最多的病种。脑卒中根据发病的原因可大致分为两大类：缺血性的脑卒中和出血性的脑卒中，而在缺血性脑卒中风险性最大的是脑梗死^【2】。急性脑梗死不但给患者带来极大生理上的病痛，而且给患者家庭和当今社会造成了深重的思想重担和经济负担。因此，我们对于急性脑梗死，务必采取极早体检诊断，极早治愈治疗，极早预防复发的心理备战态度。同时，减轻脑卒中所带来的种种痛苦，改善急性脑梗死的后遗症和神经症状，提高恢复患者的生活动手能力以及功能障碍，成为医药分析人员当务之急的大事。

早在2001年6月，经过日本三菱东京制药株式会社有关医药技术人员的不懈努力研发而成的依达拉奉，终于在日本被审核通过并上市了。我国也在2002年5月以后陆续批准依达拉奉制剂进行临床研究，由上图可以得知，3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮是五元环的酮，羰基与N原子相邻，2号位置的N原子与C原子之间连接着不饱和双键，很容易与空气中氧气发生氧化作用，所以依达拉奉的分子结构在空气中是很不稳定，遇到氧气就会氧化成没有任何活性的物质，甚至易生成高分子杂质等副产物，用久了很可能对人体造成隐性的伤害^【2】。目前国内外采用亚硫酸氢钠作抗氧化剂，但是经过试验研究其很难长时间保持其有效成分发挥其应有的治疗作用^【2】。

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